Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Strona główna Artykuły

Wybrane metody oznaczania wapnia w surowicy krwi i moczu


 

Oznaczanie stężenia wapnia całkowitego

Jest to podstawowe badanie laboratoryjne, wykorzystywane w diagnostyce zaburzeń gospodarki wapniowej. W tym celu wykorzystywane są metody chemiczne, w których jak materiał do badań służy surowica lub osocze heparynizowane. W oznaczeniu należy brać pod uwagę fakt, że wszystkie powszechnie stosowane antykoagulanty (EDTA, cytrynian sodowy, szczawian sodowy) chelatują jony wapniowe [4]. Podczas interpretacji otrzymanych wyników brane są pod uwagę zmiany stężenia białka- w tym głównie albuminy, które wpływają na zmianę stężenia wapnia całkowitego, przy jednoczesnym nie wpływaniu na zmianę stężenia fizjologicznie istotnego wolnego jonu wapniowego [4].

Oznaczanie wolnego jonu wapniowego (wapnia zjonizowanego)

Do oznaczania jonu wapniowego stosowane są elektrody jonoselektywne. Samo oznaczanie jonu wapniowego uważane jest za najlepszą metodę oceny kalcemii, pod warunkiem, że w trakcie oznaczenia w badanym materiale nie doszło do zmian pH. Ma to istotne znaczenie, ponieważ spadek stężenia jonu wodorowego (pH­) lub wzrost jego stężenia (pH¯) powodują odpowiednio wzrost lub spadek wiązania jonu wapniowego przez białka. Oznaczenie może być przeprowadzone w pełnej krwi heparynizwanej, w heparynizowanym osoczu lub w surowicy. Badanie w krwi heparyniozwanej powinno być przeprowadzone w ciągu 15 do 30 minut od momentu pobrania próbki krwi (najpóźniej w ciągu godziny). Jeżeli nie jest to możliwe, jako optymalny materiał do oznaczeń należy wybrać surowicę (osocze) [4].

Oznaczanie wapnia metodą kompleksometryczną (wg Krwaczyński J., i Osiński T., 1967)

Zasada powyższej metody opiera się na oznaczaniu wapnia przez bezpośrednie miareczkowanie solą dwusodową kwasu etylenodiaminotetraoctowego (wersenian sodowy, Na2EDTA). Oznaczenie przebiega wobec wskaźnika fluoreksonu (kalceiny). Wersenian sodowy ma zdolność do wysycania wszystkich 6 miejsc koordynacyjnych jonu Ca2+ , tworząc odpowiedni chelatowy kompleks. Po związaniu wapnia przez wersenian dochodzi do zaniku zielonej fluorescencji, a pojawia się różowe zabarwienie, świadczące o końcu miareczkowania. Przy pH większym niż 12 obecność soli magnezu , żelaza oraz fosforanów (V) nie wpływa na zdolność oznaczania wapnia [3].

Kalceina (znana również jako fluorekson, fluorexon, komplekson fluoresceiny, oftasceina) jest barwnikiem fluorescencyjnym, która w czystej postaci występuje jako pomarańczowe kryształki. Kalceina jest wzbudzana światłem niebieskim, a jej maksimum absorpcji przypada przy długości fali równej λ = 495 nm. Maksimum emisji kalceiny wyznaczono przy długości fali λ = 515 nm (kolor zielony). W reakcji izotermalnej amplifiikacji kwasów nukleinowych związek ten stosowany jest jako barwnik umożliwiający wizualizację produktu bez konieczności otwarcia probówek z produktem reakcji [7].

Odczynniki:

1) Roztwór macierzysty wersenianu (Na2-EDTA): 4% roztwór wersenianu disodowego

2) Roztwór roboczy wersenianu: macierzysty roztwór należy rozcieńczyć 100-krotnie

3) Macierzysty roztwór wzorcowy wapnia o stężeniu Ca 25 mmol/l: 2,497 g wysuszonego do stałej wagi w 110°C CaCO3 należy rozpuścić w 100 ml wody i 50 ml 1 M roztworu kwasu solnego. Całość uzupełnić woda destylowaną (2x destylowaną) do 1000 ml.

4) Roboczy roztwór wzorcowy wapnia o stężeniu Ca 2,5 mmol/l: macierzysty roztwór rozcieńczyć 10-krotnie [3].  

Wykonanie:

Do 1,5 ml 3 M roztworu KOH należy dodać o,2 ml roztworu fluoreksonu wraz z 1 ml surowicy. W wyniku zachodzącej reakcji w roztworze pojawia się żółto-zielone zabarwienie z fluorescencją. Roztwór należy następnie miareczkować roboczym roztworem wersenianu do momentu, aż żółto-zielone zabarwienie z fluorescencją przejdzie w zabarwienie różowe (bez fluorescencji). W ten sam sposób przeprowadzić miareczkowanie próby kontrolnej (z wodą) i roztworu wzorcowego. Oznaczenie stężenia wapnia w moczu przeprowadza się w identyczny sposób jak dla surowicy [3].

W metodach miareczkowych, w których równolegle miareczkuje się próbę badaną i wzorcową, stężenie oznaczanej substancji (wapń) oblicza się w analogiczny sposób jak w kolorymetrii. Stężenie roztworu, którym się miareczkuje (roztwór wersenianu) nie jest istotne. W trakcie obliczania stężenia wapnia należy uwzględnić objętość wersenianu zużytą na miareczkowanie próby badanej (surowicy) oraz wzorcowej, jak również stężenie wzorca, w przypadku gdy do miareczkowania stosuje się jednakowe objętości surowicy i roztworu wzorcowego, albo odpowiednio obliczony mnożnik, gdy objętości te nie są jednakowe.

Stężenie wapnia w surowicy (w mmol/l surowicy) można obliczyć według poniższego wzoru:

mmol/l= ml Na2EDTA  dla surowicy / ml Na2EDTA dla wzorca x 2,5 [3].

 


Tagi: wapń, wapń zjonizowany, parathormon, PTH, wolne jony wapniowe, jony wapniowe, białka, hormonalna regulacja, osocze, stężenie, metoda kompleksometryczna, metoda kolorymetryczna, zespół hiper
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



Informacje dnia: Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo" Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo" Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo"

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Job24 Obywatele Nauki NeuroSkoki Portal MaterialyInzynierskie.pl Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA Mlodym Okiem Polski Instytut Rozwoju Biznesu Analityka Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Bioszkolenia Geodezja Instytut Lotnictwa EuroLab

Szanowny Czytelniku!

 
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
 
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.

Kto będzie administratorem Twoich danych?

Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).

O jakich danych mówimy?

Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.

Dlaczego chcemy przetwarzać Twoje dane?

Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:

Komu możemy przekazać dane?

Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.

Jakie masz prawa w stosunku do Twoich danych?

Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.

Jakie są podstawy prawne przetwarzania Twoich danych?

Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.

Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
 
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
 

Newsletter

Zawsze aktualne informacje