Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Strona główna Artykuły

Metody wykorzystywane do oznaczania żelaza w różnych próbkach biologicznych


W celu odczytania wyników przeprowadzonego oznaczenia należy wykonać krzywą wzorcową :

a) roztwór podstawowy (0,3510 g FeS0 4(NH4)2SO4• 6H2O rozpu­szcza się w wodzie destylowanej uzupełniając do objętości 500 ml (1 ml tak sporządzonego roztworu zawiera 100 ɣ Fe2+)

b) roztwory wzorcowe: ze świeżo przygotowanego roztworu podsta­wowego odmierza się po: 5, 10, 15 i 20 ml do kolb miarowych na 100 ml  dodając 10 ml 25% kwasu siarkowego i uzupełniając wodą destylowaną do kreski. Z roztworów tych pobiera się kolejno po 5 ml, co odpowiada 25, 50, 75 i 100 ɣ Fe2+ do kalibrowanych probówek na 25 ml i dalej postępuje się tak, jak z badaną próbą [2].

W metodach oznaczania zawartości żelaza z rodankiem potasu wymienia się kilka najważniejszych czynników, które mają wpływ na dokładność metody:

- odczyn badanego roztworu

- stężenie odczynnika reagującego oraz jego czułość w danej metodzie

- szybkość powstawania oraz trwałość barwnego kompleksu w roztworze

- rodzaj reduktora

- odczyn środowiska, który nie uregulowany może powodować podwyższenie lub obniżenie wyników oznaczeń [2].

 

Oznaczanie Fe(II) metodą 1,10-fenantrolinową z wykorzystaniem spektrofotometrii UV-VIS

 

W trakcie oznaczania żelaza powyższą metodą dochodzi do redukcji żelaza Fe3+ do Fe2+. Po redukcji żelazo przeprowadza się w kompleks z 1,10-fenantroliną. Intensywność powstałego w próbce pomarańczowego zabarwienia jest proporcjonalna do zawartości żelaza. Zawartość żelaza oznacza się spektrofotometrycznie przy długości fali równej λ= 510 nm [4].

 

Wykonanie oznaczenia:

Należy przygotować 6 starannie umytych kolb miarowych o pojemności 50 cm3, do których kolejno należy odmierzyć: 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 oraz 2,5 ml wzorcowego roztworu soli żelaza (II) o stężeniu 50 ppm.  Do każdej kolby dodać 2 cm3  10 % roztworu chlorowodorku hydroksyloaminy oraz 5 cm3  10% cytrynianu sodu. Odczekać chwilę, po czym do próbek dodać 5 cm3 roztworu 1,10-fenantroliny (tj.: 0,25% roztwór 1,10-fenantroliny w 0,1M HCl). Zawartość kolbek  uzupełnić wodą destylowaną do kreski i dokładnie wymieszać. Próbki inkubować przez 10 minut, a następnie zmierzyć absorbancję roztworu przy długości fali równej λ= 500 nm [4].

 

Oznaczanie żelaza metodą Ramsaya z α,α’-dipirydylem (wg Homolka J., 1961)

 

Dwuwartościowe żelazo (z dodatkiem Na2SO3) w wyniku reakcji z α,α’-dipirydylem daje różowy kompleks. Wykorzystywaną do oznaczenia surowicę należy odbiałczyć (metodą na gorąco po zakwaszeniu kwasem octowym). Wytrącone białko poddaje się wytrząsaniu z chloroformem, a następnie odwirowuje [1].

Odczynniki:

1)Roztwór wzorcowy żelaza: 0,863 g 12∙hydratu siarczanu (VI) amonu i żelaza (III) (siarczanu żelazowo-amonowego), NH4Fe(SO4)2 ∙12 H2O lub 0,702 g 6∙ hydratu siarczanu (VI) amonu i żelaza(II) (siarczanu żelazowo-amonowego, soli Mohra)-(NH4)2Fe(SO4)2∙6H2O rozpuścić w wodzie, a następnie dodać 10 ml stężonego roztworu kwasu siarkowego (VI). Całość uzupełnić wodą do objętości 1000 ml. Przygotowany w ten sposób 1 ml roztworu zawiera 0,1 mg (100 µg) żelaza [1].

2)Roztwór wzorcowy (rozcieńczony): roztwór wzorcowy należy rozcieńczyć 100x w kolbie miarowej (1 ml rozcieńczonego roztworu zawiera 1 µg Fe) [1].

 

Wykonanie:

Do probówki wirówkowej odmierzyć 2 ml niezhemolizowanej surowicy wraz z dodatkiem 2 ml 0,1M roztworu Na2SO3 (tj.: Na2SO3 ∙7H2O)oraz 2 ml 0,1% roztworu α,α’-dipirydylu ( w 3% roztworze CH3COOH). Równolegle należy wykonać oznaczenie próby kontrolnej i wzorcowej, gdzie zamiast surowicy do próbek dodawana jest woda lub wzorzec.

Przygotowane w powyższy sposób 3 probówki należy dokłzdnie wymieszać za pomocą bagietki, a następnie wstawić do łaźni wodnej (wrzącej) na 5-minutową inkubację. Probówkę z próbą badaną ostudzić pod bieżącą wodą, po czym dodać do niej 2 ml chloroformu. Probówkę zamknąć korkiem i wytrząsać przez 30 sekund, a dalej odwirować, w ten sposób by zabarwiona warstwa była klarowna (bez najmniejszego śladu zmętnienia). Otrzymaną klarowną warstwę przenieść do nowej probówki chemicznej  i oznaczyć wartość absorbancji próby badanej i wzorcowej wobec próby kontrolnej. Oznaczenie wykonać przy λ= 522 nm, w kuwetach o możliwie największej grubości warstwy [1].

Opierając się na otrzymanych wynikach wykonać obliczenie:


µg/100 ml= (A(absorbancja) roztworu badanego/ A(absorbancja)wzorca x 100[1]

 

Oznaczanie żelaza w surowicy z o-fenantroliną (wg Krawczyński J., Osiński T., 1967)

 

Dwuwartościowe żelazo utrzymane w tej postaci obecnością hydroksylaminy, w reakcji z o-fenantroliną daje różowy kompleks (wymagane lekko kwasowe pH). Surowicę wykorzystywaną do oznaczenia należy odbiałczyć na gorąco w pH=4,4, a wytrącone białko oddzielić przez wytrząsanie z czterochlorkiem węgla i ponowne odwirowanie [1].


Tagi: żelazo, surowica, metoda rodankowa, spektrofotometria, roztwór wzorcowy, rodanek potasu, metodą 1, 10-fenantrolinowa, metoda Ramsaya, α, α’-dipirydyl, o-fenantrolina, peptyd hepcydyna, TSH, niedoczynność żelaza
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



Informacje dnia: Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo" Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo" Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo"

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Job24 Obywatele Nauki NeuroSkoki Portal MaterialyInzynierskie.pl Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA Mlodym Okiem Polski Instytut Rozwoju Biznesu Analityka Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Bioszkolenia Geodezja Instytut Lotnictwa EuroLab

Szanowny Czytelniku!

 
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
 
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.

Kto będzie administratorem Twoich danych?

Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).

O jakich danych mówimy?

Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.

Dlaczego chcemy przetwarzać Twoje dane?

Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:

  • dopasować treści stron i ich tematykę, w tym tematykę ukazujących się tam materiałów do Twoich zainteresowań,

  • dokonywać pomiarów, które pozwalają nam udoskonalać nasze usługi i sprawić, że będą maksymalnie odpowiadać Twoim potrzebom,

  • pokazywać Ci reklamy dopasowane do Twoich potrzeb i zainteresowań.

Komu możemy przekazać dane?

Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.

Jakie masz prawa w stosunku do Twoich danych?

Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.

Jakie są podstawy prawne przetwarzania Twoich danych?

Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.

Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
 
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
 

Newsletter

Zawsze aktualne informacje