Akceptuję
W ramach naszej witryny stosujemy pliki cookies w celu świadczenia państwu usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczone w Państwa urządzeniu końcowym. Możecie Państwo dokonać w każdym czasie zmiany ustawień dotyczących cookies. Więcej szczegółów w naszej Polityce Prywatności

Zamknij X
Strona główna Artykuły

Wybrane metody wykorzystywane do oceny funkcji płytek krwi

Wykorzystanie metody turbidymetrycznej do pomiaru agregacji płytek krwi

Do pomiaru agregacji płytek krwi wykorzystywany jest tzw. agregometr, gdzie zasada całego pomiaru polega na obserwacji zachodzących zmian w przepuszczalności światła przez osocze bogatopłytkowe (agregacja wywołana ADP) lub zawiesinę krwinek płytkowych w buforze Tyroda (agregacja wywołana trombiną). Z Wraz ze zlepianiem się krwinek płytkowych zwiększa się przepuszczalność światła, a wynik pomiaru podaje się jako odsetek agregacji, gdzie przyjmuje się za 100% agregacji – absorbancję buforu bez płytek lub osocza ubogopłytkowego, a za 0% agregacji – absorbancję płytek niestymulowanych.

Jako materiał do badań należy wykorzystać płytki krwi otrzymane metodą wirowania osocza bogatopłytkowego i zawieszone w buforze Tyroda (bądź też cytrynianowe osocze bogatopłytkowe).

Odczynniki:

1) Bufor Tyroda: 10 mM HEPES, 140 mM NaCl, mM KCl, 0,5 mM MgCl2, 5 mM NaHCO3, 10 mM glukoza (pH= 7,4)

2) Trombina (400 j. NIH/ml)

3) 10 mM roztwór ADP

Wykonanie oznaczenia: do kuwety agregometru należy wprowadzić 250 µl osocza bogatopłytkowego, zawierającego 2x108 płytek w ml bądź zawiesinę krwinek płytkowych (liczba płytek 2-3x108/ml). Próbkę mieszać dipolem magnetycznym ze stałą szybkością 1200 obr./min, należy rejestrować transmitancję (przy p600 nm) w agregatorze przed dodaniem czynnika agregującego. Dalej obserwować wzrost transmitancji po dodaniu 2,5 – 5 µl czynnika agregującego (trombina lub ADP) bezpośrednio do kuwety pomiarowej. Zmiany transmitancji zachodzące w zawiesinie płytek lub osocza bogatopłytkowego należy oznaczać wobec buforu Tyroda lub osocza ubogopłytkowego.

Proces agregacji płytek może być śledzony dzięki zastosowaniu w aparacie czytnika mikropłytek w świetle o długości fali λ= 595 nm. W tym celu do 2 studzienek aparatu należy wprowadzić po 200 µl zawiesiny płytek, a do trzeciej studzienki bufor Tyroda, a dalej:

- do pierwszej studzienki (próba kontrolna) dodać 2,5 – 5 µl buforu Tyroda

- do drugiej studzienki 2,5-5 µl trombiny.

Następnie należy rejestrować zmiany absorbancji zawiesiny płytek w każdej studzience wobec buforu Tyroda, przestrzegając okresowego wytrząsania zawiesiny, które należy prowadzić co minutę w ciągu 10 minut [2].

Agregacja płytek krwi może być mierzona, jako ilość utworzonych agregatów płytkowych i uwalnianych nukleotydów adeninowych oraz białek zmagazynowanych w ziarnistościach płytkowych. Przeprowadzone badania (in vitro) wykazały, że związek cisplatyna (stosowana, jako lek cytostatyczny w chemioterapii) ma zdolność hamowania aktywacji płytek krwi, co też potwierdzono wieloma badaniami [13].

Pomiar agregacji płytek po stymulacji ADP

a) Izolowanie płytek krwi: płytki krwi otrzymywano metodą wirowania różnicowego świeżej krwi pobranej na roztwór ACD (tj. 65 mM kwas cytrynowy, 85 mM cytrynian sodu, 110 mM glukoza, 5:1 v/v). Następnie komórki przemywano 2x zmodyfikowanym buforem Tyroda, a następnie zawieszano w tym samym buforze do stężenia 10 mg białka płytek/ml. Stężenie białka w próbce oznaczano zmodyfikowaną metodą Lowry’ego.

b) Pomiar agregacji płytek krwi: pomiar przeprowadzono w agregatorze, stosując osocze bogatopłytkowe zawierające 2 x 108 płytek w ml. Osocze bogatopłytkowe inkubowano przez 5-minut z cisplatyną (20 µM), a następnie wywoływano agregację przez dodanie do próbki roztworu ADP (10 µM) [13].

 

Cisplatyna powoduje wyraźne zahamowanie procesu agregacji. W zależności od zastosowanej dawki i czasu inkubacji z płytkami krwi, związek ten zmniejsza również sekrecję białek komórkowych. Właściwości te przemawiają za stosowaniem cisplatyny w leczeniu różnych nowotworów. Niestety kliniczne zastosowanie leku jest ograniczone m.in. ze względu na jego toksyczność hematologiczną. Co więcej, zahamowanie aktywacji płytek krwi pod wpływem działania cisplatyny może prowadzić do ograniczenia udziału płytek krwi w procesie metastazy [13].

 


Tagi: płytki krwi, adhezja, sekrecja, agregacja płytek krwi, hemostaza, trombospondyna, luminol, chemiluminescencja, agregometria
Drukuj PDF
wstecz Podziel się ze znajomymi

Recenzje



Informacje dnia: Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo" Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo" Ograniczenie soli w diecie może być groźne Nie mam jeszcze wniosków na temat pochodzenia Covid-19 Najdokładniejsze systemy satelitarnego transferu czasu Ponad połowa chorych z SARS-CoV2 cierpi na długi covid Zintegrować informacje o logistyce Wystawa "Nie to niebo"

Partnerzy

GoldenLine Fundacja Kobiety Nauki Job24 Obywatele Nauki NeuroSkoki Portal MaterialyInzynierskie.pl Uni Gdansk MULTITRAIN I MULTITRAIN II Nauki przyrodnicze KOŁO INZYNIERÓW PB ICHF PAN FUNDACJA JWP NEURONAUKA Mlodym Okiem Polski Instytut Rozwoju Biznesu Analityka Nauka w Polsce CITTRU - Centrum Innowacji, Transferu Technologii i Rozwoju Uniwersytetu Akademia PAN Chemia i Biznes Farmacom Świat Chemii Forum Akademickie Biotechnologia     Bioszkolenia Geodezja Instytut Lotnictwa EuroLab

Szanowny Czytelniku!

 
25 maja 2018 roku zacznie obowiązywać Rozporządzenie Parlamentu Europejskiego i Rady (UE) 2016/679 z dnia 27 kwietnia 2016 r (RODO). Potrzebujemy Twojej zgody na przetwarzanie Twoich danych osobowych przechowywanych w plikach cookies. Poniżej znajdziesz pełny zakres informacji na ten temat.
 
Zgadzam się na przechowywanie na urządzeniu, z którego korzystam tzw. plików cookies oraz na przetwarzanie moich danych osobowych pozostawianych w czasie korzystania przeze mnie ze strony internetowej Laboratoria.net w celach marketingowych, w tym na profilowanie i w celach analitycznych.

Kto będzie administratorem Twoich danych?

Administratorami Twoich danych będziemy my: Portal Laboratoria.net z siedzibą w Krakowie (Grupa INTS ul. Czerwone Maki 55/25 30-392 Kraków).

O jakich danych mówimy?

Chodzi o dane osobowe, które są zbierane w ramach korzystania przez Ciebie z naszych usług w tym zapisywanych w plikach cookies.

Dlaczego chcemy przetwarzać Twoje dane?

Przetwarzamy te dane w celach opisanych w polityce prywatności, między innymi aby:

Komu możemy przekazać dane?

Zgodnie z obowiązującym prawem Twoje dane możemy przekazywać podmiotom przetwarzającym je na nasze zlecenie, np. agencjom marketingowym, podwykonawcom naszych usług oraz podmiotom uprawnionym do uzyskania danych na podstawie obowiązującego prawa np. sądom lub organom ścigania – oczywiście tylko gdy wystąpią z żądaniem w oparciu o stosowną podstawę prawną.

Jakie masz prawa w stosunku do Twoich danych?

Masz między innymi prawo do żądania dostępu do danych, sprostowania, usunięcia lub ograniczenia ich przetwarzania. Możesz także wycofać zgodę na przetwarzanie danych osobowych, zgłosić sprzeciw oraz skorzystać z innych praw.

Jakie są podstawy prawne przetwarzania Twoich danych?

Każde przetwarzanie Twoich danych musi być oparte na właściwej, zgodnej z obowiązującymi przepisami, podstawie prawnej. Podstawą prawną przetwarzania Twoich danych w celu świadczenia usług, w tym dopasowywania ich do Twoich zainteresowań, analizowania ich i udoskonalania oraz zapewniania ich bezpieczeństwa jest niezbędność do wykonania umów o ich świadczenie (tymi umowami są zazwyczaj regulaminy lub podobne dokumenty dostępne w usługach, z których korzystasz). Taką podstawą prawną dla pomiarów statystycznych i marketingu własnego administratorów jest tzw. uzasadniony interes administratora. Przetwarzanie Twoich danych w celach marketingowych podmiotów trzecich będzie odbywać się na podstawie Twojej dobrowolnej zgody.

Dlatego też proszę zaznacz przycisk "zgadzam się" jeżeli zgadzasz się na przetwarzanie Twoich danych osobowych zbieranych w ramach korzystania przez ze mnie z portalu *Laboratoria.net, udostępnianych zarówno w wersji "desktop", jak i "mobile", w tym także zbieranych w tzw. plikach cookies. Wyrażenie zgody jest dobrowolne i możesz ją w dowolnym momencie wycofać.
 
Więcej w naszej POLITYCE PRYWATNOŚCI
 

Newsletter

Zawsze aktualne informacje